Non-radioactive, single-stranded labelled probe, method for its production and method of detecting a target nucleotide sequence using this probe

Abstract

Abstract Translated from French L'invention concerne une nouvelle sonde de détection d'une séquence nucléique déterminée. Elle consiste dans un ADN recombinant contenant un insérat complémentaire de la séquence nucléique à détecter et des séquences nucléiques dérivées de l'ADN (+) du phage M13, les bases entrant dans la composition de cet ADN recombinant, notamment les groupes thymine étant remplacés par des groupes 5-bromo-uracile. L'invention concerne également un procédé pour la fabrication de cette sonde, ce procédé comprenant la culture d'hôtes cellulaires, plus particulièrement E. coli, auxotrophes pour la thymine, dans un milieu contenant une teneur limitante en thymine et du 5-bromo-uracile. Après le temps d'incubation requis, on élimine le surnageant et on récupère la sonde à partir des cellules bactériennes. The invention relates to a new probe for detecting a determined nucleic sequence. It consists of a recombinant DNA containing an insert complementary to the nucleic sequence to be detected and nucleic sequences derived from the (+) DNA of phage M13, the bases used in the composition of this recombinant DNA, in particular the thymine groups being replaced by 5-bromo-uracil groups. The invention also relates to a process for the manufacture of this probe, this process comprising the cultivation of cellular hosts, more particularly E. coli, auxotrophs for thymine, in a medium containing a limiting content of thymine and of 5-bromo- uracil. After the required incubation time, the supernatant is removed and the probe is recovered from the bacterial cells.

Inventors

• 👤 Stratis Avrameas
• 👤 Hiroshi Sakamoto
• 👤 Francois Traincard
• 👤 Tuyen Vo Quang
• 👤 Jean-Luc Guesdon
• 👤 Thérèse Ter Nynck

Bibliographic Details