A highly specific method for detecting nucleic acids in solution

Abstract

Abstract Translated from German Zum Nachweis von Nukleinsäuren definierter Sequenz durch Hybridisierung mit zwei in gleicher Lösungsphase vorliegenden, zu unterschiedlichen Bereichen der nachzu­weisenden Nukleinsäure komplementären, einzelsträngigen Nukleinsäuresonden, wobei die eine Nukleinsäuresonde als Detektorsonde dient und über eine chemische Verbin­dung mindestens ein Hapten als Markierung gebunden enthält, und die andere Nukleinsäuresonde als Einfang­sonde dient und an eine feste Matrix gebunden wird, verwendet man als Hapten ein Steroid, das an mindestens eine Position der Detektorsonde, die nicht an der Wasserstoffbrückenbildung mit der nachzuweisenden Nukleinsäure beteiligt ist, über eine Brücke von minde­stens vier Atomen Länge kovalent gebunden ist, inkubiert die in Lösung vorliegende, nachzuweisende Nukleinsäure mit der Detektorsonde und der Einfangsonde in beliebi­ger Reihenfolge, wobei man die Bindung der Einfangsonde an die Matrix vor, während oder nach der Inkubation mit der nachzuweisenden Nukleinsäure bewirkt, trennt die verbleibende Lösung von dem matrixgebundenen Komplex aus Einfangsonde, nachzuweisender Nukleinsäure und Detektorsonde ab und weist den Komplex über einen seinerseits markierten Anti-Hapten-Antikörper nach. For the detection of nucleic acids of a defined sequence by hybridization with two single-stranded nucleic acid probes that are present in the same solution phase and complementary to different areas of the nucleic acid to be detected, one nucleic acid probe serving as a detector probe and containing at least one hapten bound as a label via a chemical compound, and the other nucleic acid probe serves as a capture probe and is bound to a solid matrix, a steroid is used as a hapten, which is covalently bound to at least one position of the detector probe, which is not involved in hydrogen bonding with the nucleic acid to be detected, via a bridge of at least four atoms in length, incubate the nucleic acid to be detected in solution with the detector probe and the capture probe in any order, the binding of the capture probe to the matrix before, during or after the incubation with the nucleic acid to be detected causes, separates the remaining solution from the matrix-bound complex of capture probe, nucleic acid to be detected and detector probe and detects the complex via an anti-hapten antibody labeled in turn.

Inventors

• 👤 Hans-Joachim Dr.rer.nat. Höltke
• 👤 Rudolf Dr.Rer.Nat. Seibl
• 👤 Christoph Dr.Rer.Nat. Kessler
• 👤 Ralf Prof.Dr.Rer.Nat. Mattes
• 👤 Hermann Dr.Rer.Nat. Graf

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